مراحل تهیه و برش گیری بافت های تثبیت شده:
الف)تثبیت کردن(فیکساسیون):عبارت است از کشتن ناگهانی و هم زمان یاخته های یک بافت به گونه ای که شکل وترکیب ان نسبت به زمان حیات تغییر نکند در واقع هدف اصلی از ان منعقد کردن مواد پروتوپلاسمی بدون حل کردنو متلاشی کردن یا تغییر ساختار اجزا درونی یاخته و شکل ببیرونی ان است.
مواد تثبیت کننده (فیکساتیو) نقش های متعددی دارند:
1) ثابت کردن اجزا مختلف بافتها 2) جلوگیری از اتولیز 3) ایجاد تفاوت ضریب شکست نور در قسمتهای مختلف بافت 4) نامحلول کردن اجزا یاخته 5) ایجاد تغییراتی در ساختار سطحی اجزا برای پذیرش رنگهای ویژه
مواد تثبیت کننده فیزیکی یا شیمیایی هستند که فیکساتیوهای شیمیایی خود به دو دسته ی الی وغیر الی تقسیم میشوند و عبارتند از :
اتانول/ استون/ فرمالین/استیک اسید/کلرومرکوریک و.......در عمل به جای استفاده از یک تثبیت کننده از مخلوط چند تا از انها استفاده میکنند تا هر عامل نقص عامل دیگر را جبران کند.
ب ) شستشوی بافت:منظور خارج کردن موادی است که ممکن است باعث اختلال در مراحل بعدی شوند شستشوی بافت را میتوان با اب جاری یا تعویض مایع احاطه کننده نمونه در فواصل زمانی انجام داد.زمان شستشو با اب جاری به اندازه ی زمان فیکساسیون است.
ج ) آب گیری (دهیدراتاسیون):هدف از این مرحله خارج کردن اب از بافت توسط عوامل اب گیرنده است. فرایند اب گیری الکل در غلظت های مختلف و مرحله مرحله به شرح زیر انجام میشود:
30 دقیقه الکل 50 درجه←30 دقیقه الکل 70 درجه←30 دقیقه الکل 85 درجه←45 دقیقه الکل 96 درجه ←45 دقیقه الکل 100 درجه ی1←45 دقیقه الکل 100 درجه 2
اگر در این حالت از نمونه برش بگیریم کدر است باید شفاف سازی انجام دهیم.
د ) شفاف کردن :چون الکل نمیتواند با مواد مورد استفاده در مراحل بعد مخلوط شود از مواد دیگری که قابلیت اختلاط با الکل و پارافین یا هر دو را دارند استفاده میشود به این مواد که به عنوان حلال حد واسطی بین مرحله ی اب گیری و قالب گیری بافت عمل میکنند شفاف کننده میگویند. یکی از بهترین شفاف کننده ها گزیلول است . ربای این کار ابتدا نمونه را داخل مخلوط یک به یک الکل گزیلول قرار میدهیم (45 درجه) بعد به مدت 1 ساعت ان را داخل گزیلول خالص قرار میدهیم. در صورتی که برای اب گیری از حلال هایی مثل بوتیل الکل نوع سوم/دی اکسان که هم با اب وهم با پارافین مخلوط میشوند ایتفاده شود نیازی به شفاف کردن نیست.
ه) نفوذ دادن پارافین به داخل بافت و قالب گیری ان :برای مستحکم کردن بافت های تثبیت شده باید ان را به محیطی پایدار کننده اغشته ساخت در اینجا چون جنس قالب از پارافین است از پارافین استفاده میکنیم تا بافت از ان جدا نشود برای این کار به شرح زیر عمل میکنیم: پارافین در دمای 60 درجه داخل حمام اب گرم ذوب میکنیم سپس
نمونه ها را 45 دقیقه درپارافین 1←45 دقیقه پارافین 2←45 دقیقه پارافین 3 قرار می دهیم تا کاملا مطمئن شویم که گزیلول از ان خارج شده است.
سپس داخل قالب را با گلیسرول چرب کرده و ابتدا کمی پارافین مذاب داخل ان میریزیم بعد نمونه را با پنس داخل ان قرار داده و روی ان را پارافین میریزیم.
و) برش گیری :برای برش گیری از دستگاهی به نام میکروتوم که انواع مختلفی دارد استفاده میشود. برای این کار بلوک پارافین را ذوذنقه ای شکل و به گونه ای که یک پایه داشته باشد میبریم سپس پایه رادرون یک قالب پارافینی قرار میدهیم و روی ان پارافین میریزیم تا خوب متصل شوند . قالب را بین دو پیچ نگه دارنده میکروتوم قرار داده تا محکم شود بعد درجه تنظظیم ضخامت برش را تنظیم کرده سپس با چرخاندن دسته ی میکروتوم برش مورد نظر را تهیه کرده سپس با قلم مو یک یا چند برش نواری شکل را برداشته و ارام روی سطح اب (45 درجه) حمام بن ماری قرار داده تا اب گرم باعث باز شدن چروک ها ویکنواخت شدن انها بشود سپس با استفاده از مخلوط یک به یک سفیده تخم مرغ و گلیسرول چسب البومین مایر را تهیه کرده و مقدار کمی از ان را به وسیله ی انگشت روی یک لام تمییزکشیده سپس لام را ارام وارد بن ماری کرده وبرش ها را از ان خارج میکنیم حداقل 24 ساعت زمان لازم است تا برش ها کاملا به لام بچسبند و خشک شوند.
خبرنامه وب سایت:
تبادل لینک هوشمند 
